ELISA检测原理:

本试剂盒采用双抗体“夹心法”，把捕获抗体包被于酶标板上，加入待检样品及标准品于酶标板反应孔中、捕获抗体捕获对应目的蛋白，生物素标记的检测抗体与目的蛋白结合，检测抗体再和SABC结合，形成捕获抗体-目的蛋白-检测抗体-SABC复合物，经过洗液洗涤后，未结合的成分均被洗去，加入显色底物TMB，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450 nm波长处测OD值，颜色的深浅和样品中的目的蛋白浓度呈正相关，通过绘制标准曲线计算出样品中目的蛋白的浓度，从而进行定性或半定量分析。

测前准备:

1、实验测试前30分钟，将所有的试剂及样品平衡至室温，不能加热使之融解，已经倒出的试剂请勿倒回瓶中，避免瓶中试剂污染，试剂配置或样品稀释时，切记要混匀。

2、每次检测都应该做标准曲线，使用者应估计样品待测因子的含量，来决定是否对样本进行适当的稀释检测，以便使样品中目的蛋白的浓度处于本试剂盒的最佳检测范围内。

3、当待检样品需要稀释时，如标准品/样品稀释液不够用，可以用PBST替代，请提前准备PBST。

4、洗涤液配置（1×）: 用纯水 1:30 稀释浓缩洗涤液(1ml浓缩洗涤液加入29ml的纯水)。当稀释液及洗涤液不够用时，可以用 1*PBST 替代，洗涤液中如有结晶析出，请先温育至室温，轻轻混匀，至到结晶完全溶解再进行配制，配置过程请使用纯水，避免因水污染导致实验失败。

5、抗体工作液配置：100ul生物素检测抗体（100×）加入10ml抗体稀释液中。

6、SABC工作液配置：100ul SABC（100×）加入10mlSABC稀释液中。

7、TMB 显色液的配置:使用前 5分钟，将 TMB 显色液 A 液和 B 液 1:1 混合， 避光放置备用，在储存和显色时均避免强光照射。

8、标准品配置: 取7个1.5ml离心管，分别标注：S2、S3、S4、S5、S6、S7、blank, 每管中分别加入标准品/样品稀释液 200ul，从试剂盒中取出标准品溶液（S1），用移液器吸出200ul，移至第二管S2中， 置于混合器上混匀后用移液器吸出 200ul移至第三管S3中，如此反复作对倍稀释至S7，标准品/样品稀释液为空白对照孔blank，标准品共8个孔，即：S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7、blank，当日使用，剩余弃之。

检测流程：

1、加样: 空白孔加入50μl标准品/样品稀释液，其余孔各对应加入标准品或待测样品50ul，将酶标板用封板膜封好，轻轻混匀后置37℃，孵育50分钟。

2、洗板: 用洗涤液（1×）将酶标板充分洗涤 3 次，每孔加入洗液 300μl，每次震荡/浸泡 1-2 分钟，向滤纸上印干。

3、孵育抗体：空白孔加入100ul的抗体稀释液，其余孔各加入检测抗体工作液 100ul，将酶标板用封板膜封好，轻轻混匀后置37℃，孵育50分钟。

4、洗板: 同上。

5、孵育SABC：空白孔加入100ul的SABC稀释液，其余孔各加入SABC工作液 100ul，将酶标板用封板膜封好，轻轻混匀后置37℃，孵育30分钟。

6.洗板: 同上。

7、显色：每孔加入提前配置好的TMB混合液100ul，将酶标板用封板膜封好，  轻轻混匀后置37℃，暗处反应8-20分钟，反应结果为蓝色。

8、终止反应：每孔加入50ul 终止液，轻轻混匀，此时蓝色转为黄色，20 分钟内用酶标仪在 450nm 处测OD值。

联系方式：021-60870486；15800868143(同微）